蛋白純化的目的是將目標蛋白質從細胞裂解液的全部組分中分離出來,同時仍保留蛋白的生物學活性及化學完整性。蛋白質的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務,需根據蛋白的特性選擇合適的純化方法來提高獲得的蛋白制品的純度。
三、離心
01速率區帶離心法:
實驗原理:根據分離的粒子在離心力作用下,因其在梯度液中沉降速度的不同,離心后具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內,形成幾條分開的樣品區帶,達到彼此分離的目的。
由于此法是一種不完全的沉降,沉降受物質本身大小的影響較大,一般是應用在物質大小相異而密度相同的情況。容量小,只能用于少量的制備。
02差速離心法:
實驗原理:利用樣品中各組分沉降系數的差異,對不同的微粒施以不同的離心力,經過多次離心,離心速度逐步加大,將不同的微粒依次沉降,從而實現離心分離
01超濾法:
是利用加壓膜分離技術,在一定的壓力下,使小分子溶質和溶劑穿過一定孔徑的特制薄膜,大分子溶質滯留,從而使大分子物質得到部分的純化。常和離子交換,凝膠過濾聯合使用。
02透析;
是利用小分子經過半透膜擴散到水( 或緩沖液) 的原理,將無機鹽等小分子與生物大分子分開的一種分離純化技術,常和鹽析,鹽溶等方法聯合使用。